¿Cuáles son los métodos de preparación del polvo de ácido hialurónico de bajo peso Molecular?

Ácido hialurónicoTambién conocido como ácido de vidrio, es un glucosaminoglicano compuesto de alternalternde ácido glucurónico (GlcUA) y n-acetilglucosaminun(GlcNAc) unidades. El ácido hialurónico es un polvo blanco que es inodoro e insípido. Es soluble en agua pero insoluble en disolventes orgánicos. Su peso molecularrelativo (Mr) varía de 1 × 104 a 7 × 106. Tiene buena viscoelasy reología pseudoplástica, y es ampliamente utilizado en microcirugía oftálmica, tratamiento de artritis, ingeniería de tejidos, prevención de adherquirúrgica y otros campos [1]. El ácido hialurónico puede ser producido por extracción de tejido y fermentación microbiana. El ácido hialurónico de diferentes fuentes no difiere en su estructura, pero el ácido hialurónico con diferentes valores de Mr exhibe diferentes o incluso opuestas actividades biológicas, con una obvia dependencia de Mr.

Ácido hialurónico de peso molecularDe > 2 × 106 se utiliza en cirugía oftálmica y para el tratamiento de la osteoartritis debido a sus buenas propiedades viscoelásticas; Ácido hialurónico con un peso molecularde (1-2) − 106 se utiliza en gotas para los ojos y cosméticos debido a sus buenas propiedades hidratantes; Mr. (1 a 8) × 104 ácido hialurónico de bajo peso molecularrelativo (ácido hialurónico de bajo peso molecular, ácido hialurónico de bajo peso molecular) y Mr. < 1 − 104 ácido hialurónico oligosacáridos tienen actividades biológicas tales como la promoción de la angiogénesis y la cicatride heridas y anti-tumor [2]. El autor revisa las últimas investigaciones sobre los métodos de preparación y las actividades biológicas del ácido hialurónico de bajo peso molecular.

1 métodos de preparación de ácido hialurónico de bajo peso molecular

elPeso molecular del ácido hialurónicoProducido por extracción y aislamiento de tejidos animales o fermentación microbiana es generalmente de 2 × 105 a 7 × 106. Senembargo, actualmente no existe un estándar unificado para el peso molecular del ácido hialurónico de bajo peso molecular, y generalmente se considera que es de 1 × 104 a 5 × 105. Por lo tanto, el polvo de ácido hialurónico de bajo peso molecular puede ser preparado degradando primero el ácido hialurónico hasta cierto punto, y luego purificándolo y refinándolo. Hay muchos métodos de degradación, que se pueden dividir en métodos de degradación física, métodos de degradación química y métodos de degradación biológica. Además, el ácido hialurónico de bajo peso molecular también puede ser producido por fermentación microbiana. Los diferentes métodos de degradación tienen sus propias ventajas y desventajas, y un método de degradación apropiado puede ser seleccionado de acuerdo a las necesidades reales.

1. 1 método de degradación física

El método de degradación física utiliza factores físicosDegradar el ácido hialurónicoTales como calor, cizalladura mecánica, luz ultravioleta, microondas, ultrasonido, irradiación de rayos gamma, etc. Choi et al. [3] compararon los efectos de la degradación de la irradiación con haz de electrones (EB), la irradiación con rayos gamma (GM), la irradiación con microondas (MW) y el tratamiento térmico (TH) en la degradación del polvo de ácido hialurónico. Los resultados mostraron que los cuatro métodos podían degradar la RM del ácido hialurónico de 1,04 × 106 a 2 × 105 a 3 × 105, pero todos ellos afectaron la estructura del ácido hialurónico de bajo peso molecular después de la degradación. Entre ellos, el método de tratamiento MW aumenta la absorción UV del ácido hialurónico de bajo peso molecular a 265 nm, lo que provoca dobles enlaces en la estructura molecular y cambia el color del producto a marrón. Senembargo, este método puede aumentar la actividad antioxidante del ácido hialurónico de bajo peso molecular.

Los métodos EB y GM resultan en cambios mínimos en el espectro UV deÁcido hialurónico de bajo peso molecularComparado con otros métodos, indicando cambios mínimos en la estructura molecular durante la degradación. Sin embargo, los productos resultantes tienen baja polidispersidad (Mw/Mn de 2.21 y 2.27, respectivamente), los métodos EB y GM de degradación del ácido hialurónico son más aleatorios que el método Mw. El TH es un método simple y fácil de controlar de degradación del ácido hialurónico. El polvo de ácido hialurónico se coloca en un horno a 90 °Cdurante 52 h para obtener un producto con un rango de distribución de Mr estrecho. El método de degradación física no requiere reactivos químicos, no contamina el medio ambiente, tiene un procedimiento de post-procesamiento simple, y obtiene un producto con una distribución de peso molecular estrecha y buena estabilidad térmica. Sin embargo, este método tarda mucho tiempo en degradarse, lo que no es propicio para la producción en masa. Con el fin de reducir los costos de producción, el método de degradación química se utiliza principalmente.

1. 2 método de degradación química

Algunos reactivos químicos se pueden utilizar para romperCadenas de ácido hialurónicoDe degradación. El ácido clorhídrico se utiliza comúnmente para la hidrólisis ácida, el hidróxido de sodio para la hidrólialcal, y el hipoclorito de sodio y el peróxido de hidrógeno para la degradación oxid. El principio principal de la degradación oxides que los radicales de oxígeno producidos por el oxidante romplos enlaces glicosídicos de las cadenas de ácido hialurónico. Cuanto mayor es la concentración de H2 O2, más rápida es la degradación. La adición de CuCl2 puede aumentar significativamente la tasa de degradación [4]. Además, se ha encontrado que el ácido hialurónico puede ser oxidegradado en Weissberger' sistema s [ascorbato + Cu(II)], pero la adición de algunos compuestos de mercapto como d-penicilamina y glutatión reducido puede inhibir la degradación del ácido hialurónico [5].

Además de los métodos tradicionales de degradación química, en los últimos años, Gu et al. [6] estudiaron la electroquímicaDegradación del ácido hialurónicoEs decir, el uso de electrodos Ti/TiO2-RuO2 para la electrólización de la solución de ácido hialurónico (0,1% p /V), con agitación uniforme durante el proceso de electrólisis y temperatura controlada a 50 °C. Los resultados mostraron que la RM del ácido hialurónico podía ser reducida de 1,49 ± 106 a 6,9 ± 104 en 120 min. La espectroscopia FT-IR y los resultados de 1H y 13c-rmn mostraron que la estructura química del ácido hialurónico no fue cambisignificativamente por el método electroquímico. Por lo tanto, el método electroquímico es simple y factible, con un corto tiempo de degradación, y es un nuevo método con perspectivas de aplicación. Usando un método de degradación química, la RM del producto puede ser controlada controlando la cantidad de reactivo químico agregado y el tiempo de reacción. El tiempo de degradación es corto, lo que reduce los costes de producción. Sin embargo, la desventaja es que las condiciones de reacción son relativamente duras, lo que no sólo destruye el enlace glicosídico en la cadena del azúcar, sino que también puede destruir la estructura del residuo del monosacárido. También puede haber residuos del oxidante en el producto, lo que reduce la calidad del producto.

1. 3 método de biodegradación

El ácido hialurónico es degradado por elAcción de hialuronidasa(hialuronidasa, ácido hialurónico as), que rompe el enlace glicosídico. En el pasado, la hialuronidasa se derivprincipalmente de los testículos animales. Annal- isa et al. [7] usaron hialuronidasa testicular bovina (BTH) para hidrolizar el ácido hialurónico in Vitro vitroy encontraron que el BTH puede reducir significativamente la Mr del ácido hialurónico. Cuanto mayor es la concentración de la enzima y más largo el tiempo, más corta es la cadena del ácido hialurónico. Los resultados experimentales muestran que la Mr del ácido hialurónico puede ser tan baja como 1 − 104 después de 24 h de hidrólisis enzimcon BTH 10 U·mL-1. Cui Xiangzhen et al. [8] determinaron las condiciones óptimas para la hidrólisis del ácido hialurónico catpor hialurosina, que fueron una concentración de sustrde 10 g·L-1, una concentración enzimde 150.000 U·L-1, un pH de 5,0 y una temperatura de reacción de 50 °C. El ácido hialurónico con diferentes RM se puede obtener mediante el control del tiempo de reacción. Sin embargo, el método de obtención del ácido hialurónico a partir de los testículos de animales está limitado por la materia prima y es relativamente caro. Se ha encontrado que ciertas bacterias de Streptococcuspueden producir ácido hialurónico como.

Ei-safory et al. [9] resumieron los tipos de bacterias que pueden producir EA hialuron, incluyendo Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumonia, Streptococcus intermedium, Streptococcus consellatus, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus zooepidemicus. Estas bacterias estreptocóciproducen hialuronidasa que degrada el ácido hialurónico al romper el enlace n-acetilglucosamina y producir un residuo ácido -4,5-aldónico en el extremo no degradado. Además de hialuronidasa, glucuronidasa y hexosaminidasa también tienen el efecto deÁcido hialurónico degradante[10].

La hidrólisis enzimes el método de degradación más leve, que tiene el menor impacto sobre elEstructura del ácido hialurónicoY por lo tanto su actividad. Se utiliza para preparar ácido hialurónico de bajo peso molecular, y oligosacáridos de ácido hialurónico también se pueden obtener después de la separación de cromatode gel. Sin embargo, la fuente de ácido hialurónico es limitada y costosa, lo que limita en gran medida su aplicación.

1. 4 fermentación microbiana

Los anteriores métodos de preparaciónÁcido hialurónico de bajo peso molecularTodos usan ácido hialurónico terminado para una mayor degradación, lo cual es complicado y consume mucho tiempo, y algo de ácido hialurónico también se pierde durante el proceso de degradación. En los últimos años, los estudios han demostrado que el ácido hialurónico de bajo peso molecular puede producirse directamente a través del cultivo por fermentación, principalmente cambiando la cepa, la composición del medio de cultivo o añadiendo una cierta sustancia durante el proceso de fermentación. La patente estadounidense [11] informa que el bacibacisubtilis recombinpuede producir de 2 × 104 a 8 × 104 ácido hialurónico de bajo peso molecular bajo condiciones de cultivo con una temperatura cambi. Este método consiste en cultivar a una temperatura adecuada para el crecimiento de la cepa durante un período de tiempo, y luego aumentar la temperatura para lograr el propósito de producir ácido hialurónico de bajo peso molecular.

Pires et al. [12] modificaron el medio para la fermentación de Streptococcus zooepidemicus aProducir ácido hialurónico. Usaron derivados de productos agrícolas como el hidrolizado de proteína de soja, la proteína concentrada de suero y el líquido de nude de anacardo como medio, y un medio sintético con glucosa como fuente de carbono y extracto de levadura como fuente de nitrógeno como control. El medio fue incubado en una botella agita a 37 °C y 150 r · min-1 durante 24 h. Los resultados mostraron que el Mr promedio de ácido hialurónico producido por todos los productos agrícolas como medio de cultivo estaba entre 103 y 104, entre los cuales el Mr de ácido hialurónico de bajo peso molecular producido por medio líquido de cajú es de alrededor de 2 × 104.

Liu et al. [13] añadiperóxido de hidrógeno (1,0 mmol·g-1 ácido hialurónico) y ascorbato (0,5 mmol·g-1 ácido hialurónico) al caldo de fermentación de Streptococcus zooepidemicus a las 8 y 12 h de fermentación, y utilizó la degradación oxidpara obtener el finalProducto de ácido hialurónicoCon un Mr de 8 × 104. El producto final del ácido hialurónico tiene una RM de 8 × 104, y las sustancias añadino tienen efecto sobre el crecimiento de Streptococcus zooepidemicus. Utilizando la degradación de la sustancia añadi, se añadió una cierta cantidad de ácido hialurónico que se añadió durante el proceso de fermentación, y se obtuvo el mismo ácido hialurónico LM-W. Liu et al. [14] añadiácido hialurónico al caldo de fermentación en diferentes concentraciones durante las 8 h de fermentación. A las concentraciones másicas de 0,15, 0,20 y 0,25 g·L-1, la Mr del ácido hialurónico se redujo a 4,5 × 104, 3,2 × 104 y 2,1 × 104, respectivamente.

La fermentación microbiana es un método común para producirPolvo de ácido hialurónicoY la producción directa de ácido hialurónico de bajo peso molecular cambiando las condiciones de fermentación puede eliminar la necesidad de procesos de degradación posteriores. Si las condiciones de fermentación se optimiaún más, las condiciones de fermentación se pueden ajustar de acuerdo a las necesidades reales para producir directamente ácido hialurónico con diferentes RM, reduciendo los costos de producción y teniendo un alto valor de aplicación para la producción a gran escala de ácido hialurónico LM-W.

2 actividad biológica del polvo de ácido hialurónico de bajo peso molecular

Los estudios han demostrado que elActividad biológica del polvo de ácido hialurónicoEs significativamente dependiente del peso molecular. Este artículo se centra en las actividades biológicas antitumoral, pro-respuesta inflamatoria y de regulación inmune del ácido hialurónico de bajo peso molecular.

2. 1 efecto antitumoral

Alaniz et al. [15] mostraron esoÁcido hialurónico de bajo peso molecularRedujo el crecimiento de células del carcinoma colorrectal (CCR) in vivo e in vitro. Los resultados de los experimentos in vitro mostraron que dosis bajas de ácido hialurónico de bajo peso molecular (20 μg·mL-1) era la única condición que reducsignificativamente la proliferación de células tumorales CT26. Este efecto fue mediado por el receptor CD44 y el uso de ácido hialurónico de bajo peso molecular (1 a 3) ≥ 105 grupos aumentó significativamente la apoptosis celular de CT26 (cerca del 50%) en comparación con el uso de ácido hialurónico de alto Mr (1,5 a 1,8) ≥ 106 grupos; Los experimentos in vivo mostraron que el ácido hialurónico de bajo peso molecular puede reducir el crecimiento de las células tumorales del CRC y aumentar la tasa de supervivencia de los ratones con tumores. Los autores especulan que el mecanismo es ejercer un efecto antitumoral al aumentar la presentación de antígenos por las células dendríticas (DCs). Teng et al. [16] creen que el ácido hialurónico puede regular el crecimiento y la diferenciación de las células del CRC al inhibir el mecanismo de apoptosis en conjunto con la hialuronan sintasa 3 (hialuronansintasa 3, hyaluronan S3).el mecanismo de acción del ácido hialurónico de bajo peso molecular en el antitumoral aún no es concluyente, lo que puede estar relacionado con su Mr, concentración y reacción con otros componentes de la matriz en el microambiente tumoral.

2.2 promover la respuesta inflamatoria

Hay muchos resultados de investigación sobre la relación entreÁcido hialurónico de bajo peso molecular e inflamación. Ya en 1996, Mckee et al. [17] encontraron que el ácido hialurónico de bajo peso molecular puede inducir a los macrófagos a expresar las células mononucleares química atraer a la proteina-1 (MCP-1), macrop hialurónico acidge inflam. Proteína-1 α (MIP-1α), acido hialurónico macrop en - proteína inflam- 1β (MIP-1β) y otras quimioc, causando así la inflamación. Voel MIP-1α), y macrófagos proteína inflam1 β (macrófagos proteína inflama-1 β, MIP-1β), etc., que causan inflamación. Voelcker et al. [18] creen que los fragmentos de ácido hialurónico se pueden considerar receptores tipo toll (TLR) y causar una respuesta inflamatoria.

Farwick et al. [19] usaron un modelo de epiderhumana reconstruy lo encontraronÁcido hialurónico 2 × 104Podría aumentar significativamente la expresión del factor de necrosis tumoral (TNF- -) en este modelo, indicando una respuesta inflamatoria. Sin embargo, el ácido hialurónico 5-104 no modificó significativamente la expresión de TNF- - y no mostró respuesta inflamatoria. Lyle et al. [20] investigaron el efecto del ácido hialurónico con diferentes RM en la producción de óxido nítrico en la célula de ratón RAW264. 7 en condiciones inflamatorias o no inflamatorias (el óxido nítrico es un indicador directo de la respuesta inflamatoria mediada por macrófagos). Bajo las condiciones inflamatorias más altas, el ácido hialurónico de bajo peso molecular aumentó ligeramente su producción, lo que indica que si la endotoxina se reduce a un nivel extremadamente bajo, el ácido hialurónico de bajo peso molecular no inducedirectamente respuestas inflamatorias mediada por macrófagos en los tejidos normales.

2.3 regulación inmune

Estudios nacionales y extranjeros lo han confirmadoEl ácido hialurónico está involucradoEn la regulación del sistema inmune humano. Las bajas concentraciones de ácido hialurónico tienen un ligero efecto estimulante sobre los fagocitos y las células asesinnaturales, pero inhila la transformación de los linfocitos y la formación de rosetas de glóbulos rojos. Al mismo tiempo, altas concentraciones de ácido hialurónico tienen un efecto inhibitsignificativo sobre linfocitos, fagoci, células asesinnaturales, etc. [21]. Alaniz et al. [22] encontraron que el ácido hialurónico de bajo peso molecular puede promover la maduración de DCs, aumentar la producción de IL-12 y reducir la producción de IL-10, al mismo tiempo que produce una respuesta específica citotóxica de linfot y una respuesta de protección inmunitaria. Las células dendríy/linfocitos T (DC/TL) pretratadas con ácido hialurónico de bajo peso molecular han mejorado la capacidad migratoria hacia la quimioquina ligand-19 (CCL-19) y la quimioquina ligand-21 (CCL-21), y estas capacidades migratorias aumentan la agregación de células DC/TL en los ganglios linfáticos.

2. Otros 4

Ácido hialurónico de bajo peso molecularTiene una variedad de otras actividades biológicas. Pilloni et al. [23] encontraron que los experimentos in vitro mostraron que el ácido hialurónico de bajo peso molecular puede promover la migración y la diferenciación de las células mesenquimales, promoviendo así la formación ósea. Gariboldi et al. [24] encontraron que en el caso del daño cutáneo, el ácido hialurónico de bajo peso molecular puede estimular los queratinocipara aumentar la producción de − -defensina 2, lo cual aumenta la función curativa de la piel. Que puede deberse al aumento de la actividad antibacteriana de la piel causada por el aumento de la producción de beta-defensina 2.

3 perspectivas

La preparación dePolvo de ácido hialurónico de bajo peso molecularEs un requisito previo para la investigación y la aplicación. En la actualidad, los métodos utilizados para la producción a gran escala son en su mayoría métodos de degradación química, que tienen un gran impacto en la estructura del producto obtenido. En contraste, el método de biodegradación tiene condiciones de reacción suaves y un proceso simple, y es un método de degradación que produce la mejor estructura de ácido hialurónico de bajo peso molecular. Al mismo tiempo, el método de fermentación microbiana para producir ácido hialurónico LM-W es un nuevo método con valor de desarrollo industrial, pero este método todavía está lejos de la producción a gran escala. Por lo tanto, aún se necesita más exploración e investigación para cada método.

Polvo de ácido hialurónico de bajo peso molecularTiene una variedad de actividades biológicas, y los agentes biológicos pueden ser desarrollados y preparados basados en estas actividades. Por ejemplo, se espera que el efecto antitumoral se convierta en un adyuvpara el tratamiento del tumor. Además, su efecto inmunomodulador también puede desempeñar un papel en la preparación de adyuvinmun. Hay muchas otras actividades biológicas del ácido hialurónico de bajo peso molecular, pero todavía no hay una investigación farmacológica sistemática o ensayos clínicos. Todos estos son problemas sin resolver para el ácido hialurónico de bajo peso molecular, y se necesita una investigación más profunda.

Refeference

[1]CUI Y,DUAN Q,LI Y H. The Research progress in hyaluronic (en inglés) Ácido [J]. J Changchun Univ Sci Technol, 2011,34(3) : 101-106.

[2]YANG G L,GUO X P,LUAN Y H. Aplicaciones de hya de sodio - luronato con diferentes relative Masa molecular [J], alimento y Droga,2005,7 (12) : 1-3.

[3]CHOI J,KIM J K,KIM J H,et al.degradación de hialurónico Polvo ácido por irradiación de haz de electrones, irradiación de rayos gamma, irradiación de microondas y tratamiento térmico: un estudio comparativo [J]. Carbohydr Polym,2010,79(4) : 1080-1085.

[4]LADISLAV S,VLASTA B,MONIKA S,et Degradación del medio ambiente Alto peso molecular hyaluronan   por Hidrógeno hidrógeno peroxide in  el Presencia de iones cúpricos [J]. Carbohydr Res,2006,341 (5) : 639 — 644.

[5]HRABROV E,VALACHOV K,RYCHLY J,et al.High- molar-mass hyaluronan degradación por Weissberger' sistema s: Pro- y anti-oxid. efectos de algunos Compuestos tiol [J]. Polym Degra Stab,2009,94(10) : 1867-1875.

[6]GU Z M,CAI Q Y,HE Y,et al.degradación del hialuronan por an Electroquímica electroquímica Proceso [J]. Carbohydr Polym,2010,82:521-523.

[7]ANNALISA L G,MARIO D R,IOLANDA M,et al.A complete Hyaluronan hydrodynamic (en inglés) Caracterización caracterización caracterización usando a  Exclusión del tamaño Cromatografía-triple detector array sistema durante in  vitro  Degradación enzim[J]. AnaL Biochem,2010,404(1) : 21-29.

[8]CUI X Z,LIU A H,WANG F S,et al. Condiciones de reacción de hidrólide la aicd hialurónica catpor hialuronidasa [J]. Chin J Biochem Pharm,2007,28 (3) : 161-163.

[9]EI-SAFORY N S,LEE G C,LEE C K. Caracterización de hya- luronato liasa de Steptococcus pyogenes bacteriophage H4489A [J]. Carbohydr Polym,2011,84(3) : 1182-1191.

[10]FRASER J RE,LAURENT T C,LAURENT U B.Hyaluronan: Su naturaleza, distribución, funciones y volumen de negocios [J]. Intern Med, 1997,242(1) : 27-33.

[11] acciones S  M, marrón S. producción de baja molecular  Weight hyaluronic acid: US,WO /2007 /093179[P].2007-8-23.

[12]PIRES A M B,MACEDO AC,EGUCHI S Y,et al. Producción microbiana de ácido hialurónico A partir de derivados de recursos agrícolas [J]. Biores Technol,2010,101 (16) : 6506-6509.

[13]LIU L,DU G C,CHEN J,et al.producción microbiana de ácido hialurónico de bajo peso molecular mediante la adición de peróxido de hidrógeno y ascorbato lote cultura de Streptococcus  Zooepidemimicus [J]. Biores Technol,2009,100(1) : 362-367.

[14]LIU L,DU G C,CHEN J,et al el producción de Ácido hialurónico por Cultivo en lotes de Streptococcus zooepidemicus[J]. La comida Chem,2008,110 (4) : 993 — 926.

[15]ALANIZ L,RIZZO M,MALVICINI M,et al.Low molecular  El hialuronde de peso inhiel crecimiento del carcinoma colorrectal al disminuir la proliferación de las células tumorales y estimular la respuesta inmune [J]. Cancer Lett,2009,278 (1) : 9-16.

[16]TENG B P,HEFFLER M D,LAI E C,et al.inhibición de hyalu- Ronan synthase-3 Bajo bajo subcutánea Cáncer de colon crecimiento por Aumenta la apoptosis[J]. Agente contra el cáncer Med Chem,2011,11 (7) : 620-628.

[17]MCKEE C  M,PENNO M B,COWMAN M,et al.Hyaluronan (HA) fragmentos induce  Quimioina. gen Expresión en el Macrófagos. The role of HA size and CD44[J] (en inglés). J Clin Invest, 1996,98 (10) : 2403-2413.

[18]VOELCKER V,GEBHARDT C,AVERBECK M,et al.los fragmentos de hyalu - Ronan induca la uprepreregulación de citoquinas y metaloproteasas En parte, mediante señalización vía TLR4[J]. Exp Dermatol,2008,17 (2) : 100-107.

[19]FARWICK M,GAUGLITZ G,PAVICIC T,et al.5kda hy- el ácido alurónico aumenta la regulación de algunos genes epidérmicos sin cambiar Expresión TNF-alfa en la epiderreconstituida [J]. Skin Phar- macol Physiol,2011,24(4) : 210-217.

[20]LYLE D B,BREGER J C,BAEVA L F,et al. Efectos del ácido hialurónico de bajo peso molecular sobre la producción de óxido nítrico de macrófagos murinos [J]. J Biomed Mater Res A,2010,94(3) : 893-904.

[21]KE C L,ZENG X X. Avances en la investigación sobre las bioactividades del ácido hy- alurónico [J]. Chin Med Biothchnol, 2009,4(2) : 148-151.

[22]ALANIZ L,RIZZO M, García M G,et al. Low molecular  Preacondicionamiento hialurónico de peso de células dendrítumpulsadas Aumenta su capacidad migratoria e induce inmunidad frente al murino El cáncer colorrectal (colorrectal)  Carcinoma [J]. Cáncer de cáncer  Inmunol inmunol Immunother, 2011,60(10) : 1383-1395.

[23]PILLONI A,BERBARD G W. El ácido hialurónico de bajo peso molecular aumenta la osteogénesis In vitro[J]. J Dent Res,1992,71:574.

[24]GARIBOLDI S,PALAZZO M,ZANOBBIO L,et al.bajo peso molecular el ácido hialurónico aumenta la autodefensa del epitelide la piel por inducción de − -defensina 2 vía TLR2 y TLR4[J]. J Immunol,2008,181 (3) : 2103-2110.