Cómo extraer saponinas de Tribulus Terrestris?

Tribulus terrestris, also known as tribulus, hard tribulus, or white tribulus. Bitter, pungent, warm in nature, slightly toxic, enters the liver channel. Used to treat headache and dizziness, wind rash and itching, chest and hypochondrium distending pain, breast obstruction and mastitis, red eyes and eye obstruction, consumptive-thirst, etc. 1]. Studies have confirmed that Tribulus terrestris extract, especially tribulus terrestris saponins, has pharmacological effects such as improving cardiovascular health, enhancing sexual function, lowering blood lipids, lowering blood sugar, anti-aging, and anti-tumor [2].

La extracción y análisis de los principios activos en Tribulus terrestris es la base para su posterior utilización e investigación. Este artículo revisa los métodos de extracción de saponinas totales tribulus y los métodos de análisis de contenido y ensayo. Mediante la comparación de diferentes métodos de extracción y el análisis de las ventajas y desventajas de cada método, una base se proporciona para una mayor investigación sobre saponinas tribulus.

1 métodos de extracción para saponinas totales en tribulus terrestris

De acuerdo con los informes de la literatura [4-8], los métodos de extracción de saponinas totales en Tribulus terrestris utilizan principalmente métodos de extracción por solvente. Los métodos de extracción por solvente se pueden resumir como la extracción por solvente tradicional [145], la extracción por microondas [67] y la extracción por ultrasonidos [8] (la extracción por microondas y la extracción por ultrasonidos se pueden clasificar como métodos modernos de extracción por solvente). Este artículo se explicará de acuerdo con los tres métodos anteriores.

1.1 método tradicional de extracción con disolvente

The solvent extraction method is based on the principle of like dissolves like, and the chemical components are extracted from the raw material by selecting an appropriate solvent. Saponins are generally soluble in water, methanol and dilute ethanol, easily soluble in hot water, hot methanol and hot ethanol, and insoluble in ether, chloroform and benzene. Among them, ethanol and water are often used to extract saponins. There are many traditional methods for extracting saponins, such as the maceration method, the decoction method, and the reflux extraction method. The alcohol precipitation method using water as the solvent is generally used to Extraer saponinas de tribulus total. The method uses water as a solvent, reflux extraction, filtration and concentration to obtain the extract. Then, ethanol of different concentration gradients is added to the extract. Usually, when the alcohol content is 40% to 80%, components such as starch, polysaccharides, dextrin, amino acid gum mucilage, and protein can be removed, and the saponin remains in the filtrate [3]. There are also alcohol extraction methods, such as the alcohol extraction column method and the alcohol extraction concentration method.

Wang Xiaoyang et al. 14 used the alcohol extraction column method, with ethanol as the solvent for reflux extraction. In the orthogonal test method for the preferred extraction process of tribulus terrestris saponins, three methods were used, of which the alcohol extraction column method was refluxed with 70% ethanol for 3 times, 2h each time, treated with macroporous adsorption resin, concentrated and dried to obtain the product. The results showed that the content of saponin in the dried Tribulus terrestris extract was 43.23%, and the extraction rate was 80.31%. Cao Zhenyan et al. [5 used an orthogonal experiment with an alcohol concentration method to determine that the best process for extracting tribulus saponins is to reflux 75% ethanol three times for 1 hour each time. The result was a total saponin content of 52. 19%. Both methods have a high extraction rate, but generally have more impurities and can be used for industrial production. In short, the traditional solvent extraction method is generally used to extract total tribulus saponins because of its advantages of being simple to operate and low cost. However, it also has some disadvantages, such as a long extraction time and low safety.

1.2 método de extracción por microondas

La extracción asistida por microondas es un nuevo método de extracción desarrollado que utiliza microondas para extraer sustancias. En este método, las microondas irradian en el solvente y pasan a través de la pared celular para llegar al interior de la célula. Debido a que los disolventes polares y los fluidos celulares absorben la energía de microondas, la temperatura dentro y cerca de la célula aumenta, y la presión de vaporización aumenta. Cuando la presión excede la capacidad de carga de la pared celular, la pared celular se rompe, y los ingredientes activos ubicados dentro de la célula se liberan de la célula y se transfieren al solvente.

Esta tecnología es adecuada para la extracción de sustancias naturales, y puede cumplir con los requisitos de alta eficiencia, velocidad y selectividad sin restricciones. Li et al. [6 utiliza un método ortogonal para optimizar las condiciones del proceso de extracción de euphol. Las condiciones óptimas del proceso fueron un volumen de muestra de 0.18-1.15 mm, un tiempo de extracción de 5 min, una potencia de microondas de 500 W, una relación sólido-líquido de 1:20 (g·mL-¹), y un contenido de esteroles medido de 91.3%. Por lo tanto, la extracción asistida por microondas es más rápida y más eficiente que los métodos tradicionales, con las ventajas de calentamiento uniforme, ahorro de disolvente, proceso simple y amplia aplicación. Sin embargo, todavía tiene ciertas limitaciones en teoría y aplicación. En la actualidad, la tecnología de extracción por microondas y los equipos son raramente utilizados en la producción industrial y necesitan ser promovidos [7].

1.3 método de extracción ultrasónica

Las ondas ultrasónicas generan un efecto cavitación fuerte de alta velocidad y acción de agitación, rompilas células en las hierbas medicinales y causando que el solvente penetre en las células, acelerando así la disolución de los ingredientes efectivos de las hierbas medicinales en el solvente. La aplicación de esta técnica en la extracción de ingredientes naturales de medicamentos se ha desarrollado más ampliamente en los últimos años. En la extracción de saponinas, se puede evitar la destrucción de la estructura aglicon. En comparación con el método convencional, la extracción por ultrasonidos tiene obviventajas en el tiempo de extracción y la tasa de extracción. Esta técnica también se ha utilizado en muchos estudios paraextract total tribulus saponins. Zhang Juhong et al. [8 utilizaron la extracción ultrasónica con etanol diluido como disolvente durante 30 minutos para medir el contenido total de saponinas totales en Tribulus terrestris. Y luego purificada usando una resina de adsorción macroporosa. El primer conjunto de datos mostró que el contenido máximo de saponde tribulus total fue del 2,8%. Este método no sólo acorta el tiempo de extracción y mejora la velocidad de extracción, sino que también asegura que la extracción ultrasónica no cambia la estructura de los principios activos. Por lo tanto, la extracción asistida por ultrasonido es uno de los métodos modernos de extracción por solvente más utilizados.

En resumen, mediante la comparación y el análisis de los tres diferentes métodos de extracción anteriores, sus respectivas ventajas y desventajas pueden ser vistos, lo que proporciona una referencia para la extracción efectiva de sapontotales totales de Tribulus terrestris. Véase el cuadro 1.

2 métodos de análisis y prueba de sapontotales de Tribulus terrestris

Los métodos comunes para el análisis de las saponinas totales de tribulus terrestris incluyen espectrofotometría ultravioleta visible [10-13], cromatolíquida de alto rendimiento [14.5], electroforesis capilar [161, etc. Además, el método de chip de papel también se espera que se aplique a la determinación de saponinas totales de tribulus terrestris.

2.1 ultraviole-visible espectrofotometría

El método espectrofotométrico ultravioleta es el más comúnDeterminar el contenido de saponinas tribulus total. Este método no sólo puede medir sustancias coloreadas, sino también medir con precisión sustancias incolorcon estructuras conjug[9]. Li Yan et al. [10 utilizaron el componente saponmonomérico en Tribulus terrestris como sustancia de referencia, el reactivo de color fue el reactivo E y una solución de etanol de ácido sulfúrico, la longitud de onda de determinación fue de 520 nm, y los resultados mostraron que había una buena relación lineal entre la cantidad de la sustancia de referencia y el valor de absorbancia en el rango de 0.06-0.2 mg. Li Ying et al. Al comparar las diferencias de calidad de Tribulus de diferentes orígenes, el contenido total de saponina en la fruta de Tribulus se determinó utilizando un espectrofotómetro UV-Vis. Usando diosgenina como sustancia de referencia, la elección del desarrollador de color fue explorada usando HCIO₄: vanillin (5%) como 4:1. Los resultados mostraron que la diosgenina tenía una buena relación lineal en el rango de 7,52-150,4 μg, con una alta tasa de recuperación y una fuerte estabilidad.

Zhang Ping et al. [12 utiliza espectrofotometría ultravioleta para determinar el contenido total de saponina en Tribulus de diferentes orígenes. Tribulus terrestris se utilizó como sustancia de control, y los resultados mostraron que la relación lineal era buena en el rango de 7,52-150,4 μg. Zhang Sujun et al. [13 utilizaron espectrofotometría ultravioleta con diosmina como sustancia de referencia y una longitud de onda de detección de 310 nm y un revelde color de HCIO₄ para determinar el contenido total de saponina en los frutos y taly hojas de Tribulus terrestris en diferentes épocas de cosecha con el fin de comparar los resultados. Se encontró que el contenido total de saponina de los taly hojas de Tribulus terrestris era mucho mayor que el de la fruta, y el contenido total de saponina de los taly hojas fue más alto en julio. En resumen, el método espectrofotométrico ultravioleta tiene las ventajas de un equipo relativamente simple y operación, bajo costo, velocidad de análisis rápido, y alta sensibilidad en comparación con otros métodos de análisis espectroscópico, por lo que se utiliza a menudo para el análisis de saponina.

2.2 cromatografía líquida de alto rendimiento

Con la popularización de la cromatolíquida de alto rendimiento, más y más componentes de saponina se detectan utilizando este método. La cromatolíquida de alto rendimiento utiliza un líquido como la fase móvil, y una bomba de infusión de alta presión se utiliza para transportar un disolvente único o mixto, tampón, u otra fase móvil, haciendo que la muestra a prueba se mueva, de modo que los componentes se separan. Un detector altamente sensible convierte esto en una señal detectable, permitiendo un análisis cualitativo y cuantitativo. Entre ellos, el detector debe ser determinado por las condiciones de laboratorio y las propiedades de la saponina en sí. Para algunas saponinas como la diosgenina, que no tienen absorción ultravioleta característica y no pueden ser detectadas usando un detector ultravioleta, se debe usar un detector de dispersión de luz. Li Haoyue et al. 114 utilizaron HPLC combinado con colorimetría para controlar la calidad de Tribulus terrestris. The Welch Ultimate LP-Ci (en inglés) Se utilizó una columna de 8 con metan: agua (80:20) como fase móvil. Las saponinas de Tribulus terrestris fueron detectadas y estudiadas usando saponde de Tribulus terrestris como índice. Los resultados mostraron que tanto en el método HPLC como en el método colorimétrico, la saponde Tribulus tiene una buena relación lineal entre 0.820 y 7.380 μg y 24.600 y 86.100 μg, con una tasa de recuperación promedio de 99.3% y 99.5%. El método se caracteriza por ser simple y fácil de realizar, rápido, con alta eficiencia de separación, alta sensibilidad y resultados de medición precisos. Es adecuado para la determinación del contenido de Tribulus.

2.3 electroforesis capilar

La electroforesis capilar es una técnica de cromatografía líquida en la cual los iones o partículas nucleares son conducidos por un campo eléctrico de alto voltay separados en un capilar. Entre ellos, la electroforesis capilar de alta eficiencia es ampliamente utilizada. En el análisis de la medicina tradicional China y las medicinas naturales, ya sea el análisis de hierbas crudas o medicamentos terminados, con sus ventajas únicas en la separación y el análisis, ha habido algunos progresos en la separación y la determinación cuantitativa de los componentes efectivos de la medicina tradicional China y las medicinas naturales [161. Con la creciente popularidad de la tecnología CE, es superior a HPLC en términos de costo experimental, eficiencia de separación, velocidad de separación, microcuantiy adaptabilidad. Tiene las ventajas de alta eficiencia de análisis, pequeño volumen de inyección, operación sencilla, bajo costo de análisis, y la columna capilar no se contamina fácilmente. [171. Este método ha sido ampliamente utilizado en la separación y determinación del contenido de los principios activos de las drogas naturales. Sin embargo, actualmente no hay muchos informes sobre el uso de la electroforesis capilar para detectar sapontotales de Tribulus terrestris.

2.4 método de determinación de chips de papel

Paper chip microfluidic technology is a new type of microfluidic technology that is widely used in medical diagnosis, food safety testing, environmental monitoring and other fields due to its simple and fast processing, ease of use, and low cost. The basic principle is to form channels on the paper surface to guide the fluid I18]. Among them, forming channels on filter paper with hydrophobic materials is currently the most commonly used method, that is, drawing a hydrophilic-hydrophobic contrast map on the paper to create micron-scale capillary channels on the paper [19]. Solutions can be driven to specific areas by capillary force, so no external equipment is required. The commonly used detection methods mainly include photometric detection [201, fluorescence, electrochemiluminescence, and electrochemical detection methods, among which photometric detection is the most intuitive and commonly used method.

Wu Jian et al. [2 used a paper chip to detect the effective ingredient phloretin in Fructus Gardeniae and achieved satisfactory results. Hao Zhenxia et al. 1221 used a microfluidic paper chip to rapidly detect the content of tea polyphenols in order to eliminate the difference in color development time during the test. Using this method, different diluted tea samples were rapidly tested within 3 minutes of the start of the color development reaction, and the results obtained were in good agreement with the conventional method. According to a large number of literature reports, paper chip microfluidic technology, compared with the standard method, greatly shortens the time, does not require professional laboratory equipment, and can be used for on-site detection, which has certain practical application value. Therefore, paper chips can be used in the rapid analysis and detection of traditional Chinese medicine, and have broad application prospects. At present, there is no literature reporting the detection of tribulus terrestris total saponinsEste método puede convertirse en un campo de investigación de frontera en la determinación analítica.

3 conclusión y perspectivas

A comparison of the advantages and disadvantages of the three methods for extracting tribulus terrestris total saponins can provide a reference for related researchers, who can choose the appropriate extraction method according to different needs. The ultraviolet spectrophotometry and high-phase liquid chromatography methods for testing tribulus terrestris total saponins have been widely used because of the advantages of their popular instruments and equipment and simple operation. Capillary electrophoresis and paper microfluidic technology are emerging separation and analysis techniques. Capillary electrophoresis has broad application prospects in the analysis of natural medicines, and significant progress has been made in this area. Paper microfluidic technology has been used in various fields of research due to its advantages of being fast and simple. With the development of science and technology, extraction methods and detection techniques will continue to improve and better serve the research and development of natural medicines and traditional Chinese medicine.

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