Cómo extraer saponinas de Tribulus Terrestris?

Tribulus terrestris, también conocido como Tribulus, Tribulus duro, o Tribulus blanco. Amargo, acre, de naturaleza cálida, ligeramente tóxico, entra en el canal hepático. Se utiliza para tratar el dolor de cabeza y mareos, sarpullido por el viento y picazón, pecho y el dolor de distensión del hipocondrio, obstrucción del pecho y mastitis, ojos rojos y obstrucción de los ojos, el consumo de sed, etc 1]. Los estudios han confirmado que el extracto de Tribulus terrestris, especialmente saponinas Tribulus terrestris, tiene efectos farmacológicos tales como la mejora de la salud cardiovascular, la mejora de la función sexual, la reducción de lípidos en la sangre, la reducción de azúcar en la sangre, anti-envejecimiento, y anti-tumor [2].

La extracción y análisis de los principios activos en Tribulus terrestris es la base para su posterior utilización e investigación. Este artículo revisa los métodos de extracción de saponinas totales tribulus y los métodos de análisis de contenido y ensayo. Mediante la comparación de diferentes métodos de extracción y el análisis de las ventajas y desventajas de cada método, una base se proporciona para una mayor investigación sobre saponinas tribulus.

1 métodos de extracción paraTotal saponins in tribulus terrestris (en inglés)

De acuerdo con los informes de la literatura [4-8], los métodos de extracción de saponinas totales en Tribulus terrestris utilizan principalmente métodos de extracción por solvente. Los métodos de extracción por solvente se pueden resumir como la extracción por solvente tradicional [145], la extracción por microondas [67] y la extracción por ultrasonidos [8] (la extracción por microondas y la extracción por ultrasonidos se pueden clasificar como métodos modernos de extracción por solvente). Este artículo se explicará de acuerdo con los tres métodos anteriores.

1.1 método tradicional de extracción con disolvente

El método de extracción con disolvente se basa en el principio de like disuelve like, y los componentes químicos se extrade la materia prima mediante la selección de un disolvente adecuado. Las saponinas son generalmente solubles en agua, metany etanol diluido, fácilmente soluble en agua caliente, metancaliente y etanol caliente, e insoluble en éter, cloroformy benceno. Entre ellos, el etanol y el agua se utilizan a menudo para extraer saponinas. Hay muchos métodos tradicionales para la extracción de saponinas, tales como el método de maceración, el método de decocción, y el método de extracción por reflujo. El método de precipitación de alcohol utilizando agua como disolvente se utiliza generalmente para extraer saponinas totales de tribulus. El método utiliza agua como solvente, reflujo, extracción, filtración y concentración para obtener el extracto. Luego, etanol de diferentes gradide concentración se añade al extracto. Por lo general, cuando el contenido de alcohol es de 40% a 80%, componentes tales como almidón, polisacáridos, dextrina, mucílago de goma de aminoácido, y proteínas pueden ser removidos, y la saponina permanece en el filtrado [3]. También hay métodos de extracción de alcohol, como el método de la columna de extracción de alcohol y el método de concentración de extracción de alcohol.

Wang Xiaoyang et al. 14 utilizaron el método de la columna de extracción de alcohol, con etanol como disolvente para la extracción por reflujo. En el método de ensayo ortogonal para el proceso de extracción preferido de saponinas tribulus terrestris, se utilizaron tres métodos, de los cuales el método de la columna de extracción de alcohol se refluyó con etanol al 70% durante 3 veces, 2h cada vez, tratado con resina de adsormacroporosa, concentrado y secado para obtener el producto. Los resultados mostraron que el contenido de saponen el extracto seco de Tribulus terrestris fue de 43.23%, y la tasa de extracción fue de 80.31%. Cao Zhenyan et al. [5 utilizó un experimento ortogonal con un método de concentración de alcohol para determinar que el mejor proceso para la extracción de saponde tribulus es reflujo de etanol al 75% tres veces durante 1 hora cada vez. El resultado fue un contenido total de saponina de 52. 19%. Ambos métodos tienen una alta tasa de extracción, pero generalmente tienen más impurezas y se pueden utilizar para la producción industrial. En resumen, el método tradicional de extracción por solvente se utiliza generalmente para extraer saponinas totales tribulus debido a sus ventajas de ser fácil de operar y bajo costo. Sin embargo, también tiene algunas desventajas, tales como un largo tiempo de extracción y baja seguridad.

1.2 método de extracción por microondas

La extracción asistida por microondas es un nuevo método de extracción desarrollado que utiliza microondas para extraer sustancias. En este método, las microondas irradian en el solvente y pasan a través de la pared celular para llegar al interior de la célula. Debido a que los disolventes polares y los fluidos celulares absorben la energía de microondas, la temperatura dentro y cerca de la célula aumenta, y la presión de vaporización aumenta. Cuando la presión excede la capacidad de carga de la pared celular, la pared celular se rompe, y los ingredientes activos ubicados dentro de la célula se liberan de la célula y se transfieren al solvente.

Esta tecnología es adecuada para la extracción de sustancias naturales, y puede cumplir con los requisitos de alta eficiencia, velocidad y selectividad sin restricciones. Li et al. [6 utiliza un método ortogonal para optimizar las condiciones del proceso de extracción de euphol. Las condiciones óptimas del proceso fueron un volumen de muestra de 0.18-1.15 mm, un tiempo de extracción de 5 min, una potencia de microondas de 500 W, una relación sólido-líquido de 1:20 (g·mL-¹), y un contenido de esteroles medido de 91.3%. Por lo tanto, la extracción asistida por microondas es más rápida y más eficiente que los métodos tradicionales, con las ventajas de calentamiento uniforme, ahorro de disolvente, proceso simple y amplia aplicación. Sin embargo, todavía tiene ciertas limitaciones en teoría y aplicación. En la actualidad, la tecnología de extracción por microondas y los equipos son raramente utilizados en la producción industrial y necesitan ser promovidos [7].

1.3 método de extracción ultrasónica

Las ondas ultrasónicas generan un efecto cavitación fuerte de alta velocidad y acción de agitación, rompilas células en las hierbas medicinales y causando que el solvente penetre en las células, acelerando así la disolución de los ingredientes efectivos de las hierbas medicinales en el solvente. La aplicación de esta técnica en la extracción de ingredientes naturales de medicamentos se ha desarrollado más ampliamente en los últimos años. En la extracción de saponinas, se puede evitar la destrucción de la estructura aglicon. En comparación con el método convencional, la extracción por ultrasonidos tiene obviventajas en el tiempo de extracción y la tasa de extracción. Esta técnica también se ha utilizado en muchos estudios para extraer saponinas totales tribulus. Zhang Juhong et al. [8 utilizaron la extracción ultrasónica con etanol diluido como disolvente durante 30 minutos para medir el contenido total de saponinas totales en Tribulus terrestris. Y luego purificada usando una resina de adsorción macroporosa. El primer conjunto de datos mostró que el contenido máximo de saponde tribulus total fue del 2,8%. Este método no sólo acorta el tiempo de extracción y mejora la velocidad de extracción, sino que también asegura que la extracción ultrasónica no cambia la estructura de los principios activos. Por lo tanto, la extracción asistida por ultrasonido es uno de los métodos modernos de extracción por solvente más utilizados.

En resumen, mediante la comparación y el análisis de los tres diferentes métodos de extracción anteriores, sus respectivas ventajas y desventajas pueden ser vistos, lo que proporciona una referencia para la extracción efectiva de sapontotales totales de Tribulus terrestris. Véase el cuadro 1.

2 métodos de análisis y prueba de sapontotales de Tribulus terrestris

Métodos comunes para el análisis deLas saponinas totales de tribulus terrestris incluyen espectrofotometría ultravioleta visible[10-13], cromatolíquida de alto rendimiento [14.5], electroforesis capilar [161, etc. Además, el método de chip de papel también se espera que se aplique a la determinación de saponinas totales de tribulus terrestris.

2.1 ultraviole-visible espectrofotometría

El método espectrofotométrico ultravioleta es el método más común para determinar el contenido de saponinas totales de tribulus. Este método no sólo puede medir sustancias coloreadas, sino también medir con precisión sustancias incolorcon estructuras conjug[9]. Li Yan et al. [10 utilizaron el componente saponmonomérico en Tribulus terrestris como sustancia de referencia, el reactivo de color fue el reactivo E y una solución de etanol de ácido sulfúrico, la longitud de onda de determinación fue de 520 nm, y los resultados mostraron que había una buena relación lineal entre la cantidad de la sustancia de referencia y el valor de absorbancia en el rango de 0.06-0.2 mg. Li Ying et al. Al comparar las diferencias de calidad de Tribulus de diferentes orígenes, el contenido total de saponina en la fruta de Tribulus se determinó utilizando un espectrofotómetro UV-Vis. Usando diosgenina como sustancia de referencia, la elección del desarrollador de color fue explorada usando HCIO₄: vanillin (5%) como 4:1. Los resultados mostraron que la diosgenina tenía una buena relación lineal en el rango de 7,52-150,4 μg, con una alta tasa de recuperación y una fuerte estabilidad.

Zhang Ping et al. [12 utiliza espectrofotometría ultravioleta para determinar el contenido total de saponina en Tribulus de diferentes orígenes. Tribulus terrestris se utilizó como sustancia de control, y los resultados mostraron que la relación lineal era buena en el rango de 7,52-150,4 μg. Zhang Sujun et al. [13 utilizaron espectrofotometría ultravioleta con diosmina como sustancia de referencia y una longitud de onda de detección de 310 nm y un revelde color de HCIO₄ para determinar el contenido total de saponina en los frutos y taly hojas de Tribulus terrestris en diferentes épocas de cosecha con el fin de comparar los resultados. Se encontró que el contenido total de saponina de los taly hojas de Tribulus terrestris era mucho mayor que el de la fruta, y el contenido total de saponina de los taly hojas fue más alto en julio. En resumen, el método espectrofotométrico ultravioleta tiene las ventajas de un equipo relativamente simple y operación, bajo costo, velocidad de análisis rápido, y alta sensibilidad en comparación con otros métodos de análisis espectroscópico, por lo que se utiliza a menudo para el análisis de saponina.

2.2 cromatografía líquida de alto rendimiento

Con la popularización de la cromatolíquida de alto rendimiento, más y más componentes de saponina se detectan utilizando este método. La cromatolíquida de alto rendimiento utiliza un líquido como la fase móvil, y una bomba de infusión de alta presión se utiliza para transportar un disolvente único o mixto, tampón, u otra fase móvil, haciendo que la muestra a prueba se mueva, de modo que los componentes se separan. Un detector altamente sensible convierte esto en una señal detectable, permitiendo un análisis cualitativo y cuantitativo. Entre ellos, el detector debe ser determinado por las condiciones de laboratorio y las propiedades de la saponina en sí. Para algunas saponinas como la diosgenina, que no tienen absorción ultravioleta característica y no pueden ser detectadas usando un detector ultravioleta, se debe usar un detector de dispersión de luz. Li Haoyue et al. 114 utilizaron HPLC combinado con colorimetría para controlar la calidad de Tribulus terrestris. The Welch Ultimate LP-Ci (en inglés) Se utilizó una columna de 8 con metan: agua (80:20) como fase móvil. Las saponinas de Tribulus terrestris fueron detectadas y estudiadas usando saponde de Tribulus terrestris como índice. Los resultados mostraron que tanto en el método HPLC como en el método colorimétrico, la saponde Tribulus tiene una buena relación lineal entre 0.820 y 7.380 μg y 24.600 y 86.100 μg, con una tasa de recuperación promedio de 99.3% y 99.5%. El método se caracteriza por ser simple y fácil de realizar, rápido, con alta eficiencia de separación, alta sensibilidad y resultados de medición precisos. Es adecuado para la determinación del contenido de Tribulus.

2.3 electroforesis capilar

La electroforesis capilar es una técnica de cromatografía líquida en la cual los iones o partículas nucleares son conducidos por un campo eléctrico de alto voltay separados en un capilar. Entre ellos, la electroforesis capilar de alta eficiencia es ampliamente utilizada. En el análisis de la medicina tradicional China y las medicinas naturales, ya sea el análisis de hierbas crudas o medicamentos terminados, con sus ventajas únicas en la separación y el análisis, ha habido algunos progresos en la separación y la determinación cuantitativa de los componentes efectivos de la medicina tradicional China y las medicinas naturales [161. Con la creciente popularidad de la tecnología CE, es superior a HPLC en términos de costo experimental, eficiencia de separación, velocidad de separación, microcuantiy adaptabilidad. Tiene las ventajas de alta eficiencia de análisis, pequeño volumen de inyección, operación sencilla, bajo costo de análisis, y la columna capilar no se contamina fácilmente. [171. Este método ha sido ampliamente utilizado en la separación y determinación del contenido de los principios activos de las drogas naturales. Sin embargo, actualmente no hay muchos informes sobre el uso de la electroforesis capilar para detectar sapontotales de Tribulus terrestris.

2.4 método de determinación de chips de papel

La tecnología microfluídica de chip de papel es un nuevo tipo de tecnología microfluídica que es ampliamente utilizada en diagnóstico médico, pruebas de seguridad alimentaria, monitoreo ambiental y otros campos debido a su procesamiento sencillo y rápido, facilidad de uso y bajo costo. El principio básico es formar canales sobre la superficie del papel para guiar el fluido I18]. Entre ellos, la formación de canales en papel filtro con materiales hidrofóbicos es actualmente el método más comúnmente utilizado, es decir, dibujar un mapa de contraste hidrofílico-hidrofóbico en el papel para crear canales capilares a escala de micronen el papel [19]. Las soluciones pueden ser condua áreas específicas por fuerza capilar, por lo que no se requiere ningún equipo externo. Los métodos de detección comúnmente utilizados incluyen principalmente la detección fotométrica [201, fluoresc, electroquimiolumin, y métodos de detección electroquímica, entre los cuales la detección fotométrica es el método más intuitivo y comúnmente utilizado.

Wu Jian et al. [2 usaron un chip de papel para detectar el ingrediente efectivo floretina en Fructus Gardeniae y lograron resultados satisfactorios. Hao Zhenxia et al. 1221 utilizaron un chip de papel microfluídico para detectar rápidamente el contenido de polifenoles de té con el fin de eliminar la diferencia en el tiempo de desarrollo de color durante la prueba. Usando este método, diferentes muestras de té diluido fueron rápidamente probadas dentro de los 3 minutos del inicio de la reacción de desarrollo del color, y los resultados obtenidos estuvieron en buen acuerdo con el método convencional. Según un gran número de informes de la literatura, la tecnología microfluídica de la viruta de papel, comparada con el método estándar, acorta grandemente el tiempo, no requiere el equipo profesional del laboratorio, y se puede utilizar para la detección in situ, que tiene cierto valor práctico de la aplicación. Por lo tanto, los chips de papel pueden ser utilizados en el análisis rápido y la detección de la medicina tradicional China, y tienen amplias perspectivas de aplicación. En la actualidad, no hay literatura reportla detección de saponinas totales de tribulus terrestris, y este método puede convertirse en un campo de investigación de frontera en la determinación analítica.

3 conclusión y perspectivas

Una comparación de las ventajas y desventajas de los tres métodos para extraer saponinas totales tribulus terrestris puede proporcionar una referencia para los investigadores relacionados, que pueden elegir el método de extracción adecuado de acuerdo A las diferentes necesidades. La espectrofotometría ultravioleta y los métodos de cromatolíquida de alta fase para la prueba de sapontotales tribulus terrestris han sido ampliamente utilizados debido a las ventajas de sus instrumentos y equipos populares y la operación sencilla. La electroforesis capilar y la tecnología microfluídica del papel son técnicas emergentes de separación y análisis. La electroforesis capilar tiene amplias perspectivas de aplicación en el análisis de medicamentos naturales, y se ha avanzado significativamente en esta área. La tecnología microfluídica de papel ha sido utilizada en diversos campos de investigación debido a sus ventajas de ser rápida y sencilla. Con el desarrollo de la ciencia y la tecnología, los métodos de extracción y técnicas de detección seguirán mejorando y servir mejor a la investigación y el desarrollo de las medicinas naturales y la medicina tradicional China.

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