Cómo extraer y examinar luteína?

1 la investigación actual y el estado de industrialización de luteína

La luteína es un pigmento vegetal natural que no sólo tiene un efecto color.También tiene efectos antioxidantes y potenciadores de la inmunidad en seres humanos y animales, y puede prevenir eficazmente la degeneración macular [1] y el cáncer [2]. La luteína ha sido ampliamente utilizada en medicina, productos de salud, alimentos, cosméticos, piensos y otros campos [3]. La caléndula es la materia prima más importante para la extracción de luteína [4]. Las Marigolds se dividen en Marigolds ornamentales y Marigolds pigmentadas. Las marigolds del pigmentnaranja amarillo contienen niveles más altos de luteína [5]. Son una planta altamente adaptable que es fácil de crecer y tiene un efecto expectorante [6]. En la actualidad, las características generales de las variedades nacionales de caléndula no son tan buenas como las de las variedades importadas [7].

Actualmente, China representa alrededor del 90% del mundo#39;s Marigold área de cultivo, yLa luteína se utiliza principalmente en piensosEn el país y en el extranjero. Kemin Food Co. en los Estados Unidos produce una bebida funcional que contiene luteína [8]. Actualmente, China's Zhongjin Natural Pigments Group Co., Ltd. y Meikeer (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. están desarrollando cápsulas de luteína que avanzan hacia el sector de los alimentos para la salud; Shanxi Hengkang Dairy Company' su filial Tiancheng Biotechnology Company[9] utiliza la luteína extrade las caléngoldas como aditivo en la alimentación de los pollos y ha cultivado caléngolas a gran escala a nivel local, formando una agricultura local orientada al turismo ornamental; En 1998, los estudiantes de la universidad de Qingdao produjeron un producto de luteína relativamente puro [10] y obtuvieron una patente para la producción de luteína utilizando tecnología de extracción de CO2 supercrítica.

2 métodos de extracción de luteína

Actualmente, el principalLos métodos de extracción para la luteína son secado, extracción, extracción por microondasMacer, ultrasonido y extracción asistida por enzimas.

Método de secado 2.1

Un nuevo tipo de secador de tambor rotse utiliza para triturar y secar caléndulas para obtener luteína. Cuando la relación de batimiento es diferente, la eficiencia de batifluctúa entre 70% y 90%. La cantidad de luteína depende del tiempo de secado; Cuando el tiempo de secado es el mismo, el contenido de luteína obtenido por secado a 60 °C es mayor que el obtenido por secado a 70 °C [8].

2.2 método de extracción

La extracción dePolvo de luteína de caléngoldosHa sido industrializado. El método de extracción de luteína de caléngoldos usando CO2 supercrítico es utilizar las flores de caléngolo como materia prima después de la fermentación, secado y tritur, y luego utilizar CO2 supercrítico con etanol como agente de arrastre para extraer extracto de caléngolo. El extracto de la flor de Marigold es saponificado con hidróxido de potasio para obtener una resina de luteína colornatural soluble en agua [8]. Li Gaofeng et al. [11] extrajluteína de caléngoldos mediante extracción supercrítica con CO2. La mayor tasa de extracción de luteína se obtuvo cuando la presión de extracción fue de 45 MPa, la temperatura fue de 50 °C, la presión en la separación I fue de 8 MPa, la temperatura en la separación I fue de 55 °C, y la temperatura en la separación II fue de 20 °C. Xu Pingru et al. [12] usaron la extracción supercrítica de CO2 para extraer luteína de caléngoldos con un rendimiento de 8,24 mg/g.

2.3 método de extracción por microondas

Las microondas son una forma de calentamiento penetrante instantáneo. La acción del campo de microondas rompe las paredes celulares de las plantas, acelerando así la tasa de extracción y aumentando efectivamente el rendimiento del producto [13]. Xu Xia et al. [14] usaron aMétodo de microondas para extraer luteína de partículas de caléndulaUtilizando éter de petróleo como disolvente de extracción. Cuando la potencia de microondas fue de 240W, la relación material líquido fue de 1:25, y el tiempo de extracción fue de 45s, el rendimiento de luteína obtenido fue de 13,43 mg/g. Li Jianying et al. [15] usaron la extracción por microondas para extraer luteína de la cáscara de los cítricos y el té. 6#El aceite disolvente fue seleccionado como el mejor solvente de extracción. Para la cáscara de cítricos, cuando la potencia de microondas es de 800W y el tiempo de extracción es de 25s, la eficiencia de extracción de luteína de la cáscara de cítricos es la más alta, con 71,6%; Para el té, cuando la potencia de microondas es de 680W, la relación material líquido es 1:25, y el tiempo de extracción es de 30, se obtiene la mayor tasa de extracción de luteína, en el 65,45%.

2.4 método de extracción

El proceso incluye principalmente pretratamiento de la materia prima, trituración, extracción, filtración, concentración, secado, etc., y el disolvente utilizado varía en función del pigmento y la materia prima [16]. Xia Shulin et al. [17] utilizaron tetrahidrofurano como disolvente de extracción para obtener luteína cruda, que se cristalizó para obtener un 97,6% de luteína pura. Li Xiaomin et al. [16] encontraron que el mejorDisolvente para extraer luteína de la cáscara de los cítricos secosFue tetrahidrofurano, con una temperatura de 60°C y un tiempo de 72 horas, y el contenido de luteína del extracto fue superior al 50%.

2.5 método de ultrasonido

El ultrasonido puede generar y transmitir energía poderosa. Cuando se aplica ultrasonido de alta energía a un líquido, el líquido se desgara en muchas cavidades pequeñas cuando está en un estado diluido. Estas cavidades se cierran en un instante, generando alta presión instantánea cuando se cierran, es decir, el efecto cavitación. El efecto cavitación del ultrasonido genera una presión extremadamente alta, que hace que las paredes celulares del material aplastado y todo el organismo se romp, y todo el proceso de aplastse completa en un instante. Al mismo tiempo, el efecto vibratorio de las ondas ultrasónicas potencia la liberación, difusión y disolución de sustancias intracelulares, lo cual es beneficioso para la extracción de ingredientes efectivos en las células [18].

Dai Gang et al. [18] usaron un método ultrasónico para extraer ésteres de luteína de caléngoldos. El disolvente de extracción era 80% hexano; La temperatura era de 30°C, la relación material-líquido era 1:30, y el tiempo fue de 20 min; La tasa de extracción fue del 93,9% cuando la potencia ultrasónica fue de 800 W, que fue un 24,7% mayor que la tasa de extracción convencional. Con el fin de explorar el proceso de extracción de luteína de caléngoldos, Ye Zhaowei et al. [19] utilizaron el método de calentamiento por baño de agua y elRendimiento de luteína por ultrasicaciónComo estándar para determinar el método óptimo de extracción. Los resultados mostraron que la extracción de luteína por ultrasonización fue significativamente mejor que los otros dos métodos, y el contenido podría alcanzar 21.91 mg/g.

2.6 método de extracción asistida por enzimas

Dado que las enzimas pueden destruir la estructura de las células, las sustancias dentro de las células están más expuestas durante la extracción, y la permeabilidad del aceite se incrementa [13]. Li Xiuxia et al.Luteína extrade proteína de maíz por método de extracción asistida por enzima. Los parámetros óptifueron concentración enzim7682u /g, concentración de sustr8.8%, tiempo de digestión enzim2.2h, rendimiento de luteína 64.65ug/g [20]. Matoushek [21] mostró que los calgoldos se pretrataron con celulasa durante un período de tiempo y luego se extrajeron y saponificaron con un solvente orgánico. El rendimiento de luteína fue 33% más alto que el del grupo de control libre de enzimas.

2.7 ventajas y desventajas de los métodos de extracción de luteína

(1) método de extracción: en comparación con el método tradicional de disolvente orgánico, el uso de la extracción con CO2 supercrítico para obtener luteína tiene las ventajas de no dejar residuos de disolvente, evitando la toxicidad del proceso de extracción para el cuerpo humano y la contaminación ambiental. El gas CO2 es barato y fácil de obtener, no tóxico, seguro, de bajo costo, fácil de separar y rápido de extraer. Este método tiene las ventajas de un proceso simple, bajo consumo de energía, protección del medio ambiente, alta pureza del producto, color positivo, buena resistencia al calor y la luz, y el color estable.

(2) método de extracción. Debido al largo tiempo de extracción, la luteína será destruida a temperaturas más altas y sufrirá degradación oxid[22].

(3) método ultrasónico.La extracción de luteína utilizando el método ultrasónicoPuede mejorar en gran medida su eficiencia de extracción. Bajo las mismas otras condiciones experimentales, el método ultrasónico y el método de microondas tienen las características de corto tiempo de extracción y alta eficiencia de extracción. El método ultrasónico puede completamenteDisolver la luteína en flores de caléndulaAumenta la velocidad de disolución, acorta el tiempo de extracción y tiene una alta eficiencia de extracción. Elimina el impacto de las altas temperaturas en los ingredientes extraídos, ahorra el consumo de disolventes y ha reemplazado gradualmente los métodos tradicionales de extracción.

(4) método de extracción asistida por enzimas. El método de extracción asistida por enzimas utiliza celulasa para tratar la pared celular, destruir la estructura de la pared celular, y permitir que el solvente orgánico entre rápidamente en la célula, facilitando la extracción [23]. El método de extracción asistida por enzima puede mejorar la tasa de extracción de luteína porque el medio enzimático está activo. En comparación con el método de extracción con disolvente orgánico, la mayoría de los investigadores de este método han llevado a cabo investigaciones en laboratorio, y faltan aplicaciones industriales a gran escala [23]. En la actualidad, los investigadores todavía necesitan estudiar si la celulasa tiene un impacto en la pureza del producto al eliminar la pared celular.

3 métodos de determinación de luteína

3.1 cromatolíquida de alta presión para determinación de luteína

La cromatolíquida de alto rendimiento (HPLC) es una rama de la tecnología de cromatoque se ha desarrollado a partir de la cromatolíquida clásica. HPLC es un método de separación sensible, eficiente y rápido que puede detectar con precisión el contenido de varios componentes en una muestra. Actualmente es el método más ampliamente utilizado para el análisis cuantitativo de la luteína [24].

Zhang Guanshun et al. [25] usaron cromatolíquida de alta presión para determinar el contenido de luteína, usando acetonitrilo: metan(95:5) como fase móvil. La solución de luteína tiene el mejor efecto de absorción a una longitud de onda de 446 nm. Chen Jieli et al. [26] utilizaron acetonitrilo: metan(98:2) como fase móvil, con una velocidad de flujo de 0,8 mL/min, la temperatura de la columna era de 25°C, el volumen de inyección era de 20μL, la luteína se disolvió en etanol al 95%, y la exploración mostró que la tasa de absorción era más alta a 446nm. Este laboratorio determinó el contenido de luteína en el pigmento caléndula por cromatolíquida de alta presión. Una columna Shimadzu ODS-3 C18 (− 5 − m4.6 − 250mm) fue utilizada como la columna cromatográfica, con V (acetonitrilo): V (cloroform) = 92:8 como la fase móvil. La longitud de onda de detección fue de 450nm, flujo: 1,5 mL/min, temperatura de detección: 35°C, volumen de inyección: 10 μL, y el contenido de luteína detectado fue de 0,7 a 2,4%.

3.2 el método colormétrico

La colorimetría se basa en Lambert-Beer' ley s (espectrofotometría ultravioleta visible). La espectrofotometría ultravioleta visible (UV-vis) es un método simple, rápido y de bajo costo para un análisis preciso basado en la proporcionalidad entre la concentración de la sustancia que se está midiendo y la absorbancia [27]. Li Gaofeng [28] mejoró el resultado de la determinación de luteína en un 33% al ajustar la relación hexano: acetonitrilo: metana 70:25:5. Sin embargo, la incapacidad de analizar diferentes isómeros de luteína, la baja sensibilidad, y la susceptia la interferencia siguen siendo desventajas prominentes de la espectrofotometría ultravioleta visible, lo que restringe severamente su aplicación y desarrollo.

3.3 ventajas y desventajas de los métodos de determinación con luteína

La cromatolíquida de alta presión (HPLC) se puede utilizar para separar varios isómeros carotenoides [27]. La cromatolíquida de alta presión (HPLC) es un método para determinar la luteína que es precisa y estable, y puede detectar rápida y eficientemente el contenido de componentes en una muestra. Es adecuado paraDeterminar el contenido de luteína. La cromatolíquida de alta presión (HPLC) es altamente específica y precisa, pero lleva mucho tiempo. La espectrofotometría UV visible es rápida, pero tiene baja sensibilidad, es susceptible a interfer, tiene una especificidad débil y no es lo suficientemente precisa. El contenido de luteína en los caléngoldos se determinó usando espectrofotometría UV-Visible. Comparado con otros metodos existentes, tiene las ventajas de ser r ã ¡Pido y f ã ¡Cil de operar, bajo coste de detecci ã ³ n y bajo consumo de disolventes. Es adecuado para la detección del contenido total de luteína en caléngoldos y sus productos procesados crudos y refin.

4 funciones de la luteína

Las verduras, frutas y zanahorias son ricas en luteína, conTienen el mayor contenido de luteína[24]. La luteína puede retrasar el debilitamiento dela visión y la ceguera causada por la degeneración macular en los ancianos. La luteína también tiene buena coloración [31], funciones anticcáncer y anticoxid. Ha sido catalocomo coloralimentario y nutriente en Europa y otros países [29].

4.1 función de coloración

La luteína puede cambiar el color del cuerpo de los animalesMejorar la fertilización y nacimientos de los huevos, e incrementar la tasa reproductiva. La coloración de la luteína se puede utilizar en las yemas de huevo y en los alimentos para aves y pollos. Ya que la gente tiende a preferir amarillo a amarillo para el valor nutricional del pollo, lutein&#El buen efecto color39;s ha sido ampliamente utilizado como aditivo alimenticio en países de todo el mundo. La luteína es un pigmento natural sin efectos secundarios. También cumple con la demanda del mercado y las normas de salud debido a sus propiedades seguras y nutritivas [30-31].

4.2 función anticcáncer

La luteína es uno de los principales carotenoides en la sangre humana y tiene funciones biológicas especiales en la inhibición del crecimiento de tumores [32-33]. Estudios recientes han demostrado que la luteína puede inhibir el crecimiento de varios tipos de cáncer, como el cáncer de mama, cáncer de colon y cáncer de piel. La investigación llevada a cabo por la escuela de medicina de la universidad de nueva York ha mostrado que existe una estrecha relación entre la incidencia de cáncer de seno y el consumo de luteína. La incidencia de cáncer de mama en el grupo experimental con consumo bajo de luteína fue de 2,08 a 2,21 veces mayor que en el grupo con consumo alto de luteína [34-35].

4.3 prevención de la pérdida de visión

La luteína puede prevenir eficazmente la degeneración macular relacionada con la edad (DMAE) y las cataratas [36].El consumo Regular de luteína puede prevenir eficazmente el efecto nocivoS de radiación de ordenador sobre el cuerpo humano [37]. Estudios han demostrado que el pigmento macular en el ojo humano se compone de dos tipos de luteína que se encuentran en la dieta, la luteína y la zeaxantina. En pacientes de 60 a 81 años con degeneración macular relacionada con la edad, estudios clínicos han demostrado que después de 15 semanas de suplementcon luteína, el contenido de pigmento macular ha aumentado significativamente, reparando el tejido retinidañado [38]. Por lo tanto, la suplementación con luteína puede mejorar significativamente la pigmentación macular relacionada con la edad y prevenir la degeneración macular.

Función antioxidante

La luteína es segura y no tóxicaTiene propiedades antioxidantes, y es ampliamente utilizado en medicina [39]. Las especies reactivas de oxígeno en el cuerpo humano son un factor importante que daña la salud humana. La luteína, como un antioxidante, puede inhibir la actividad de especies reactivas del oxígeno y evitar que dañlas células normales. La luteína puede proteger el cuerpo de daños al apagar el oxígeno singlete y la captura de radicales activos de oxígeno a través de la extinción física o química [40]. Los resultados de investigaciones recientes muestran [41] que el antioxidante natural luteína puede prevenir el daño a la piel causado por el sol#39;s rayos nocivos. Por lo tanto, la adición de una cierta cantidad de luteína a los alimentos puede prevenir una serie de enfermedades causadas por el envejecimiento de órganos en el cuerpo humano.La luteína también puede usarse en cosméticaPara prevenir lesiones cutáneas.

5 problemas y perspectivas de desarrollo

5.1 problemas

Las verduras verdes, las frutas y las flores son ricas en luteína, pero las caléndulas tienen el contenido más alto de luteína [42]. Las Marigolds se dividen en Marigolds pigmentadas y Marigolds ornam, y la luteína se extrae generalmente de Marigolds pigment. Las semillas de caléndula ahora se importan principalmente del extranjero [42]. Algunas compañías extranjeras están a la vanguardia de la investigación, desarrollo y aplicación. Aunque China también investiga constantemente sobre la luteína, todavía hay margen para mejorar en comparación con otros países.

En la actualidad, el contenido de luteína de China's variedades de Marigold pigmento es relativamente baja, y tienen una pobre resistencia a la enfermedad del punto negro. La enfermedad del punto negro puede formar manchas marrones en las hojas de caléncea, que continúan extendiéndose, causando eventualmente que las hojas se marchiten y mueran. Dentro de 7 días, puede causar rápidamente la muerte de toda la planta, restringiendo severamente la producción de caléndrio. En la actualidad, hay una falta de variedades resistentes a las enfermedades en el país y en el extranjero. Los últimos resultados de la investigación del centro de investigación de biotecnología agrícola de Beijing de la Academia de ciencias agrícolas y forestales de Beijing muestran que el índice de enfermedad del principal cultivar de pigmento caléndiga en el campo es tan alto como 76.29. El índice de enfermedad de algunos otros cultivares también es generalmente alto, siendo el mejor 56.67 y el resto por encima de 70. Esto indica que los cultivares de pigmento de caléncea resistentes a la mancha negra son muy escasos en el mercado interno. Actualmente,Producción de luteína en ChinaConsiste en el procesamiento de flores de caléndula en gránulos secos, que luego se procesen en extracto de luteína o bajo en polvo de luteína para la venta. Se utiliza como materia prima para los usuarios#39; Procesamiento posterior o como colorde alimentación [43]. La tecnología de producción para la preparación de luteína de alto contenido y pureza para su uso en alimentos y medicina aún no está madura, y muchos institutos de investigación todavía la están desarrollando. Por lo tanto, es necesario mejorar la tecnología eficiente y segura de extracción y purificación de luteína.

5.2 perspectivas de desarrollo

La luteína es un pigmento natural con un buen poder colorante, beneficios nutricionales y de salud, y se utiliza ampliamente en alimentos, aditivos médicos y piensos. La luteína también puede prevenir la degeneración macular, tumores, enfermedades cardiovasculares y mejorar el cuerpo#39;s sistema inmune. Tendrá amplias perspectivas en los ámbitos alimentario y médico. Lutein recibió la certificación GRAS de la administración de alimentos y medicamentos de los Estados Unidos en 2002. Los ésteres de luteína y luteína son muy populares en el mercado estadounidense [44].

Debido a su capacidad colornatural y sus efectos nutricionales y de salud dual,La luteína tiene un gran potencial de desarrollo y aplicación[20]. 1 g de luteína vale lo mismo que 1 g de oro [6], y se le ha dado la reputación de "oro vegetal". Actualmente, hay un déficit del mercado mundial de cerca de 1 millón de toneladas de luteína [45]. Por lo tanto, hay una enorme perspectiva de mercado para la producción industrial de caléngolde y la extracción de luteína. Cada año, las empresas y fábricas continúan aumentando la producción de caléngoldos.

Basado en las perspectivas de mercado yValor comercial de la luteínaEl desarrollo y producción de variedades con derechos de propiedad intelectual independientes es el camino de desarrollo sostenible de la industria de caléndula, que es de vital importancia para la promoción de la industrialización y la construcción de la marca en China. En el futuro, debemos incrementar los esfuerzos para cultivar variedades de Marigold pigmento con alto contenido de luteína y alta resistencia a la enfermedad del punto negro. Al mismo tiempo, también debemos desarrollar procesos eficientes y seguros de extracción de luteína y productos de luteína, ampliar los campos de aplicación de la luteína y hacer que sirva mejor a los campos de la medicina, la alimentación y la atención de la salud.

referencias

[1] Li Yongxiang, Cao Duanlin. Avances en la investigación sobre la extracción y aplicación de luteína [J]. Shanxi Chemical Industry, 2004, 24(1): 17-18.

[2] Sun Zhen, Yao Huiyuan. El efecto anticanceroso de la luteína y el estado actual de la investigación [J]. Biotechnology Newsletter, 2005(1): 84-86.

[3] Wu Zhigang, Wang Ping, Lv Shuangshuang, et al. Progreso de la investigación en marigolds pigmentados [J]. Liaoning Agricultural Sciences, 2007 (4): 33-37.

[4] Meng Zhe, Liu Hongyun. Introducción a luteína [J]. Educación química, 2007 (3): 3-4.

[5] Li Dajing, Liu Chunquan, Fang Guizhen. Determinación del contenido de luteína y éster de luteína en flores de caléndula de diferentes cepas [J]. Forest Chemical Industry, 2007, 27(2): 106-108.

[6] Huang Yuling. Investigación sobre la tecnología del cultivo de la calovina y el proceso de extracción de luteína [D]. Fuzhou: Fujian Agriculture and Forestry University, 2013.

[7] Li Na, Wang Ping, Wu Zhigang, et al. Estado de la investigación y perspectivas de desarrollo de los marigoldos pigmentados [J]. Northern Horticulture, 2010 (10): 228-231.

[8] Xu Xiulan, Zhao Guohua, Chen Jianquan, et al. Progreso de la investigación de luteína [J]. Cereales, aceites y grasas, 2004 (10): 3-7.

[9] Huo Bingyin. 40 millones de mu de flores de caléndula son tan rojas como el fuego [N]. Shanxi Life Morning News, 2002-08-20 (en inglés).

[10] Li Yongxiang, Cao Duanlin. Avances en la investigación en la extracción y aplicación de luteína [J]. Shanxi Chemical Industry, 2004, 24 (1): 17-18.

[11] Li Gaofeng, Nie Yongliang, Wang Peiwei. Optimización del proceso de extracción de luteína de flores de Marigold mediante la extracción de CO2 supercrítico [J]. Modern Chemical Industry, 2009, 29 (2): 182-186.

[12] Xu Pingru, Yang Zhonglin, Shao Youyuan. Optimización y control de las condiciones de proceso para la extracción supercrítica de luteína con CO2 [J]. Chemical Technology and Development, 2011, 40 (8): 5-7.

[13] Wang Yanbo, Shi Yan, Tang Huian. Avances en la investigación sobre la extracción, eficacia y aplicación de la luteína [J]. China Brewing, 2011 (7): 1-5.

[14] Xu X. estudio sobre la naturaleza del agente de extracción de luteína en caléngoldos [D]. Wuxi: universidad Jiangnan, 2005 (9): 18-20.

[15] Li J Y, Deng Y. estudio sobre el método de extracción por microondas de luteína [J]. Aditivos alimentarios, 2004, 25 (8): 121-124.

[16] Li Xiaomin. Estudio sobre la extracción de luteína de la cáscara de naranja por método de extracción [J]. Anhui Agricultural Science, 2009, 37(11): 4851-4853.

[17] Xia Shulin, Ji Benhua, Ma Bingpeng, et al. Estudio sobre el proceso de extracción de luteína de flores de caléndula [J]. Anhui Agricultural Science, 2006, 34(19): 5029-5030.

[18] Dai Gang, Su Ji, Chen Yaping, et al. Estudio sobre la extracción de luteína de caléndula por onda ultrasónica [J]. Yunnan Chemical Industry, 2010, 37(3): 40-41.

[19] Ye Zhaowei, Li Xun, Liu Zhuming, et al. Comparación de tres métodos de extracción de luteína de caléngoldos. [J]. Hubei Agricultural Sciences, 2012, 53(4): 875-876.

[20] Li Xiuxia, Han Lujia. Optimización del proceso de extracción enzimasistida por luteinasa para proteína de maíz en polvo [J]. Diario chino de cereales, aceites y alimentos, 2009, 24(9): 29-31.

[21] Barzana E, Rubio D, Santamria RI, et al. Extracción enzimmediada por solvente de carotenoides de flores de caléndula (Tagetes erecl.) [J]. J Agric Food Chem, 2002 (50): 4491-4496.

[22] Cao Guangmei, Zhao Guisen, He Yanli. Lutein's efecto protector sobre la visión y el proceso de extracción [J]. Food and Drugs, 2012, 14(5): 199-202.

[23] Lv Ning. Extracción y prospecde luteína de calígoldos [J]. Hunan Feed, 2016(1): 20-25.

[24] Guo Wei. Optimización del proceso de extracción de Marigold luteína y separación y purificación. [D], Harbin: universidad de ingeniería de Harbin, 2006.

[25] Zhang Guanshun. Determinación del contenido de luteína por HPLC [J]. Strait Pharmacy, 2004, 16 (6): 63-64.

[26] Chen Jieli, Li Feng, Lou Yuyang, et al. Determinación del contenido de luteína mediante cromatolíquida de alta potencia [J]. Guangdong Chemical Industry, 2015, 42 (305): 210-211.

[27] Liang Minhui, Cui Yajuan, He Mei, et al. Avances en la investigación en los métodos de análisis y detección de luteína [J]. Ciencia y tecnología de la industria alimentaria, 2015, 8: 390-394.

[28] Li G. tecnología de extracción y método de análisis de luteína en flores de caléndula [D]. Taiyuan: China Research Institute of Daily Chemical Industry, 2009.

[29] Wu Y, Li S. propiedades, funciones Y aplicaciones de la luteína comestinatural en el procesamiento de alimentos [J]. Food Science and Technology and Economics, 2015, 40(1): 59-63.

[30] Zhang Hui, Li Tao, Xu Gongshi. Un coloralimentario natural con un futuro prometedor: la luteína [J]. China Food Additives, 2004 (5): 45-48.

[31] Han Xiuping, Zhang Xuyuan. Progress of Research of lutein coloring [J] (en inglés). Anhui Agricultural Science. 2009, 37 (6): 2343-2344.

[32] Ding Jiaxing. Extracción del pigmento natural comestiluteína [J]. Gansu Science and Technology, 2003, 19 (7): 97-98.

[33] Meng Xianghe, Mao Zhonggui. Función promotora de la salud de la luteína [J]. China Food Additives, 2003 (1): 17-20.

[34] Jean Soon Park, Boon PChew, Ten SWong. Luteína dietdietde extracto de Marigold inhiel desarrollo de Tumor mamario en BALB [J]. The Journal of Nutrition, 1998, 128(10): 1650-1656.

[35] Guo Zhiyou, Gao Cuiling, Song Ru, et al. Función y aplicación de la luteína [J]. Hebei Agricultural Science, 2010, 14(2): 52-53.

[36] Li Dajing, Pang Huili, Liu Chunquan. Progreso de la investigación sobre el efecto protector de la luteína y zeaxantina en los ojos [J]. Jiangsu Agricultural Science, 2013, 41(9): 1-4.

[37] Sowbhagya H B, Krishnamurthy N, Krishnamurthy N. colornatural de Marigold - química y tecnología [J]. Food and Reviews International, 2004, 20(1): 33-50.

[38] You Xin. La luteína y su función protectora para los ojos [J]. China Food Additives, 2003, 5: 1-3.

[39] Su Qing, Li Qian, Chen Hao, et al. Investigación sobre el efecto antioxidante y prooxidante de la luteína [J]. Ciencia y tecnología de la industria alimentaria, 2014, 35(9): 68-71.

[40] Li Haoming. Descripción de la investigación de la luteína de caléndula y sus funciones fisiológicas [J]. China Food Additives, 2001 (4): 31-33.

[41] Yang Lifei, Deng Yu. Estudio preliminar sobre el proceso de extracción de luteína [J]. Guangzhou Food Industry Science and Technology, 2004, 79 (1): 45-47.

[42] Song Youliang, Wu Dianxing, Qian Guoren, et al. Progreso de la investigación de luteína [J]. Comunicación de ciencia y tecnología agrícola, 2013, 11: 138-140.

[43] Wu Xinzhuang, Zhang Hua, Wang Xiaoke, et al. Progreso de la investigación en la preparación de la tecnología de luteína Calcídica [J]. Ciencia y tecnología de la industria alimentaria, 2012, 33 (6): 456-459.

[44] O'Donnell, C.D. Function alfutures [J]. Alimentos preparados, 2004, 173 (4): 1-4, 6, 8-9.

[45] Lin Dengui, Zeng Li, Wang Peng, et al. Estado de la investigación y tendencia del desarrollo de Marigold [J]. Shanghai Agricultural Journal, 2014, 30(6): 145-149.

[46] Yu Xiaoli. Lutein product Research [J] (en inglés). Inner Mongolia Petrochemical Industry, 2005(5): 2-3.